Η Δέσποινα Πούλου γεννήθηκε και μεγάλωσε στη Θεσσαλονίκη. Είναι Επίκουρη Καθηγήτρια Πολιτισμού και Ψηφιακών Οπτικοακουστικών Μέσων στο Τμήμα Πολιτισμικής Τεχνολογίας και Επικοινωνίας του Πανεπιστημίου Αιγαίου. Από το 2023 εργάζεται και στο Ελληνικό Ανοικτό Πανεπιστήμιο, ως συνεργαζόμενο εκπαιδευτικό προσωπικό, στο πρόγραμμα «Σπουδές Κινηματογραφικής Πρακτικής και Έρευνας». Σπούδασε οπτικοακουστικές τέχνες στο Πανεπιστήμιο Αιγαίου, στο Ιόνιο Πανεπιστήμιο και στην Ανώτατη Σχολή Καλών Τεχνών. Ολοκλήρωσε το διδακτορικό της, με διάκριση, το 2016, στο Τμήμα Φιλοσοφίας και Παιδαγωγικής του Αριστοτελείου Πανεπιστημίου Θεσσαλονίκης. Η έρευνά της επικεντρώνεται σε ζητήματα φιλοσοφίας και αισθητικής του κινηματογράφου, όπως και σε θέματα διακειμενικότητας και διαμεσικότητας στον κινηματογράφο.